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SP免疫組化試劑盒,免疫組化試劑盒。上海信帆銷售免疫組化實驗,省去你實驗的各種麻煩,一站式采購齊全。免疫組化試劑盒包含了二抗,顯色液,鏈酶親和素等試劑,為你的免疫組化實驗助力,咨詢!
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所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等
SP免疫組化試劑盒,免疫組化試劑盒
SP(小鼠/兔IgG)-POD Kit 說明書
產(chǎn)品內(nèi)容:
封閉液(正常山羊血清) 10ml
3% H2O2 10ml
Bio-羊抗小鼠/兔IgG 濃縮液200ul
鏈酶親和素-POD 濃縮液100ul
稀釋液 30ml
20×DAB 顯色液A 1ml
20×DAB 顯色液B 1ml
保存:
如果長時間不使用,請將所有試劑存放于-20℃,如經(jīng)常使用,可將封閉液,3% H2O2 和20×DAB
顯色液B 存放于2-8℃以方便使用。
SP免疫組化試劑盒,免疫組化試劑盒
產(chǎn)品說明:
本試劑盒適合于一抗為小鼠/兔IgG 的免疫組化實驗DAB 顯色。
SP 試劑盒是專為免疫組化和其他免疫檢測而設(shè)計的,用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親
和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì),同親和素一樣,對生物素有*的親和力,親
和素是一個堿性蛋白質(zhì)(PI=10),經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點接近中性,
對組織和細(xì)胞的非特異吸附很低,因此基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。
操作步驟:(以石蠟切片為例)
1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯,三次乙醇)。
2. 3% H2O2 室溫處理5-10 分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3 次。
3.可選步聚:
a、熱修復(fù)抗原,將切片浸入0.01M 檸檬酸鈉緩沖液(PH6.0),電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電,
間隔5-10 分鐘后,反復(fù)1-2 次。冷卻后PBS(pH7.2-7.6)洗滌1-2 次。
b、酶消化,滴加消化液,37℃10 分鐘,PBS(pH7.2-7.4)洗滌2-3 次。
c、跳過此步,直接進(jìn)入下一步。
4. 滴加封閉液,室溫20 分鐘。甩去多余液體,免洗。
5. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋(稀釋后的一抗4℃可保存一周),也可另行購買抗體稀釋液。
滴加稀釋的一抗37℃ 孵育1 小時左右或20℃ 2 小時左右,也可4℃過夜。PBS(pH7.2-7.4)洗滌3
次,每次2 分鐘。(一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來說,陽
性染色強(qiáng)度不夠時,可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時間;背景過高時,可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時
間。)
6. 根據(jù)用量,用稀釋液將Bio-羊抗小鼠/兔IgG 濃縮液按1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入10ul
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Bio-羊抗小鼠/兔IgG 濃縮液混勻,此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/兔IgG 工作液,
20-37℃ 孵育30 分鐘。PBS(pH7.2-7.4)洗滌3 次,每次2 分鐘。
7.根據(jù)使用量,用稀釋液將鏈酶親和素-POD 濃縮液按1:100 稀釋成工作液(1ml 稀釋液加入10ul
鏈酶親和素-POD 濃縮液混勻,此工作液4℃可保存一周)。滴加鏈酶親和素-POD 工作液,20-37℃,
30 分鐘。PBS (pH7.2-7.4)洗滌4 次,每次5 分鐘。
8.DAB 顯色:根據(jù)用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1ml PBS 加入50ul 20×DAB 顯色液A,加
入50ul 20×DAB 顯色液B 。充分混勻后滴加到切片上。室溫顯色,鏡下控制反應(yīng)時間,一般在5-30
分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。
9.蘇木素輕度復(fù)染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。
對于細(xì)胞爬片,固定后,PBS 漂洗兩次,再用0.5% Triton X-100 室溫孵育20 分鐘,PBS 漂洗
兩次,3% H2O2 處理15 分鐘;PBS 漂洗兩次,接上述第4 步。
對于冰凍切片,固定后,PBS 漂洗兩次,接上述第二步。
注意事項:
如果染色背景過高,在SP 反應(yīng)之后,DAB 顯色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20 的PBST
(pH7.2-7.4)洗滌切片4 次,PBS 洗2 次,然后DAB 顯色。
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