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elisa雙抗夾心法和間接法的區(qū)別

更新時(shí)間:2024-10-12      瀏覽次數(shù):515

elisa雙抗夾心法和間接法的區(qū)別

ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))中的雙抗體夾心法和間接法是兩種不同的檢測(cè)方法,它們?cè)谠?、?yīng)用以及特點(diǎn)上存在一些區(qū)別。

一、原理區(qū)別

1、雙抗體夾心法

l該方法主要用于檢測(cè)抗原,特別是二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原。

l首先,將特異性捕獲抗體固定在固相載體上,形成固相抗體。

l然后,加入待測(cè)樣品,樣品中的特異性抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。

l接著,加入酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體(即二抗),該抗體與固相抗原抗體復(fù)合物中的抗原結(jié)合,形成雙抗體夾心結(jié)構(gòu)。

l最后,加入底物進(jìn)行顯色反應(yīng),顏色反應(yīng)的深淺與待測(cè)抗原的含量成正比。

 

2、間接法

l該方法主要用于檢測(cè)抗體。

l首先,將抗原固定在固相載體上。

l然后,加入待測(cè)樣品(含有待測(cè)抗體),抗體與抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。

l接著,加入酶標(biāo)記的二抗(通常是針對(duì)目標(biāo)抗體的二抗),該二抗與固相抗原抗體復(fù)合物中的抗體結(jié)合。

l最后,加入底物進(jìn)行顯色反應(yīng),顏色反應(yīng)的深淺與待測(cè)抗體的含量成正比。

二、應(yīng)用區(qū)別

1、雙抗體夾心法

v適用于復(fù)雜樣品,抗原不需要進(jìn)行純化即可用于檢測(cè)。 

v靈敏度通常較高,因?yàn)閵A心結(jié)構(gòu)可以增強(qiáng)信號(hào)

v特異性也較高,因?yàn)樾枰獌蓚€(gè)不同的抗體識(shí)別同一抗原。

v常用于生物標(biāo)志物的檢測(cè)、疾病診斷等。

 

2、間接法

v適用于檢測(cè)樣品中抗體的存在和濃度。

v操作相對(duì)簡(jiǎn)單,通常只需要一個(gè)抗原和一個(gè)酶標(biāo)記的二抗。

v靈敏度相對(duì)較低,因?yàn)橹灰蕾囉诳贵w與抗原的結(jié)合。

v特異性較高,但可能受到樣品中其他抗體的影響。

v常用于免疫學(xué)研究、疫苗評(píng)估等。

 

綜上所述,ELISA中的雙抗體夾心法和間接法在原理、應(yīng)用以及特點(diǎn)上存在明顯的區(qū)別。選擇哪種方法取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、樣品類型以及待測(cè)分子的性質(zhì)。

ELISA試劑盒.png


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