5′-核苷酸酶（5′-NT）的測(cè)定試劑盒的注意點(diǎn)

（比色法）

一、測(cè)定意義：

5′-核苷酸酶（5′-NT）廣泛分布于肝臟、膽道系統(tǒng)及各

種器官和組織中。血清中此酶活力增高（2～6）主要見于膽

道系統(tǒng)疾病，如阻塞性黃疸，原發(fā)性及繼發(fā)性肝癌等，且通

常與 ALP 的活力變化相平行。其增高機(jī)理是因高濃度的膽

鹽促使 5′-NT 從細(xì)胞膜上溶解出來，或膜通透性改變所致，

在骨骼系統(tǒng)的疾患如腫瘤轉(zhuǎn)移、畸形性骨炎、甲狀旁腺機(jī)能

亢進(jìn)、佝僂病等，ALP 活力通常增高，而 5′-NT 仍為正常

或?yàn)榕R界值。所以對(duì) ALP 活力增高患者，測(cè)定此酶有助于

判斷 ALP 活力增高是膽道系統(tǒng)疾病還是骨骼系統(tǒng)疾病引

起。此外，妊娠婦女及兒童期 5′-NT 不增高，但 ALP 均升

高。

二、測(cè)定原理

5′-核苷酸酶（5′-NT）催化腺苷-5′-磷酸水解，生成腺

苷和無機(jī)磷。測(cè)定產(chǎn)物無機(jī)磷的含量，代表 5′-NT 活力?？?/span>

以用抑制劑去除其他酶的影響。

三、試劑組成與配制：（100T/48 樣）

試劑一：液體 80mL×1 瓶，4℃冷藏 6 個(gè)月；過飽和溶液，

會(huì)有針狀結(jié)晶析出，取上清使用。

試劑二：液體 12mL×1 瓶，4℃冷藏 6 個(gè)月。

試劑三：液體 6mL×1 瓶。4℃冷藏 6 個(gè)月。

試劑四：粉劑 2 支，稀釋液 6mL×2 支，4℃冷藏 1 年。臨用

時(shí)將1支粉劑倒入1支稀釋液中，混勻溶解（現(xiàn)

用現(xiàn)配），配好后 4℃可保存二周。

試劑五：液體 60mL×2 瓶，該試劑有腐蝕性,盡量不要碰到

皮膚上，4℃保存 1 年。

試劑六：液體 50mL×1 瓶，該試劑有腐蝕性,盡量不要碰到

皮膚上，室溫或 4℃保存 1 年。

試劑七：粉劑×1瓶，

4℃保存1年；臨用前每瓶加雙蒸水40mL

溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后 4℃避光可保存一周；

試劑八：粉劑×1 瓶，4℃保存 1 年；每瓶加雙蒸水 50mL 溶

解，溶解后 4℃保存 3 個(gè)月；

工作液一的配制：按試劑一：試劑二：試劑四=7:1:1 的比例

配制，現(xiàn)用現(xiàn)配。根據(jù)您的樣本數(shù)，放寬 1-2 個(gè)

樣本的量，需多少配多少。

工作液二的配制：按試劑一：試劑二：試劑三：試劑四=6:1:1:1

的比例配制，現(xiàn)用現(xiàn)配。根據(jù)您的樣本數(shù)，放寬

1-2 個(gè)樣本的量，需多少配多少。

定磷劑的配制：按雙蒸水：試劑六:試劑七:試劑八=2:1:1:1

比例，先后順序配制,現(xiàn)用現(xiàn)配,好后 4℃避光可保

存 48 小時(shí)。（配試劑所用器皿以及雙蒸水，一定

嚴(yán)格防止磷污染）

試劑九：6mmol/L 磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液 5mL×1 瓶，4℃冷藏 6 個(gè)月；

0.06mmol/L 磷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：取 6mmol/L 磷標(biāo)準(zhǔn)貯備

液 0.05mL 用試劑五稀釋至 5mL 即（100 倍稀釋），

現(xiàn)用現(xiàn)配,配好后可保存 48 小時(shí)。

六、注意點(diǎn)：

1、血漿可能會(huì)出現(xiàn)混濁，如有混濁可 3500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘

取上清進(jìn)行檢測(cè)。與金屬螯合的抗凝劑會(huì)干擾反應(yīng)。肝素

抗凝不會(huì)影響。

2、如樣本中酶活性偏低，可將酶促反應(yīng)時(shí)間延長至 60 分鐘，

亦可（計(jì)算公式相應(yīng)改變）。

3、所用器皿嚴(yán)防磷污染，測(cè)試所用試管要求嚴(yán)格，要沒有一

點(diǎn)磷，若試管放過磷酸或磷酸鹽緩沖液，一定要洗得非常

干凈，要先用清潔劑加水煮，再用自來水沖，最后用蒸餾

水沖干凈。最好用一次性塑料試管（本所有售），避免磷污

染是檢測(cè)成敗的關(guān)鍵。

附錄Ⅰ ：組織中 5′-NT 測(cè)定

一、樣本前處理：

準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）:體積（mL）=1:9

的比例，加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件機(jī)械勻漿，

2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定。

[注]：不可用含磷的試劑作為勻漿介質(zhì)（例如 PBS），建

議用生理鹽水。

附錄Ⅱ：血清（漿）5'-NT 測(cè)定

一、樣本前處理：血清（漿）直接取樣進(jìn)行檢測(cè)。

5′-核苷酸酶（5′-NT）的測(cè)定試劑盒的注意點(diǎn)