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噻唑蘭MTT的正確配置方法

更新時(shí)間:2022-05-20      瀏覽次數(shù):1368

噻唑蘭MTT的正確配置方法


上海信帆生物供應(yīng)噻唑蘭MTT,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,價(jià)格低廉!


稱取25mg MTT粉末溶解在5mg/ml的工作液,4℃保存。一周內(nèi)使用。


產(chǎn)品參數(shù)

其它名稱:噻唑蘭;噻唑藍(lán)溴化四唑;3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide

298-93-1

分子式:C18H16BrN5S          

分子量:  黃色至橙色粉末

純度:  >98%

溶解性:溶于水(20 mg/ml),緩沖鹽溶液(5 mg/ml)

結(jié)構(gòu)式:

 

噻唑蘭(MTT是一種可接受氫離子的化合物染料,帶正電荷,具有細(xì)胞膜滲透性。活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠催M(jìn)入的MTT-甲臜結(jié)晶,而死細(xì)胞不具有此功能。甲臜結(jié)晶是不能穿透細(xì)胞膜,因此沉積在處于增殖且未受損傷的細(xì)胞內(nèi)。甲臜結(jié)晶可用570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量與活細(xì)胞數(shù)目成正比,用以評(píng)估細(xì)胞存活狀況。


使用方法:

1:接種細(xì)胞:用含10%胎牛血清的培養(yǎng)基配制單個(gè)細(xì)胞懸液,以每孔1000-10000個(gè)細(xì)胞量接種到96孔板,每孔體積200ul。

2: 培養(yǎng)細(xì)胞:正常培養(yǎng)及加藥等處理細(xì)胞。

3:呈色:培養(yǎng)及處理完畢后,PBS清洗每孔細(xì)胞后,每孔加MTT溶液20ul(5mg/ml用PBS配制,pH=7.4),繼續(xù)培養(yǎng)箱孵育4 h。

4: 終止培養(yǎng):小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液,對(duì)于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO,振蕩10min,使結(jié)晶物充分融解。

5:比色:490nm酶聯(lián)免疫監(jiān)測(cè)儀上測(cè)定各孔光吸收值,記錄結(jié)果,以時(shí)間為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。


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