玉米赤霉烯酮酶免檢測試劑盒適合檢測什么樣本？

上海信帆生物供應(yīng)玉米赤霉烯酮酶免檢測試劑盒，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，現(xiàn)貨充足。

玉米赤霉烯酮(Zearaleaone)ELISA 檢測試劑盒說明書 

【概要】

玉米赤霉烯酮（Zearaleaone，ZEN）又稱F-2 毒素，是玉米赤霉菌的代謝產(chǎn)物，有雌激素樣作用，具有較強的生殖毒性致畸作用，可引起動物發(fā)生雌激素亢進癥，導致動物不孕或流產(chǎn)，對家禽、豬、牛和羊的影響較大，給畜牧業(yè)帶來很大經(jīng)濟損失。

【適用范圍】

本試劑盒可定性、定量檢測谷物及其加工制品和飼料中的

玉米赤霉烯酮。

【試驗原理】

本試劑盒采用間接競爭ELISA 方法，在酶標板微孔條上預包被玉米赤霉烯酮抗原，樣本中玉米赤霉烯酮和此抗原競爭結(jié)合抗玉米赤霉烯酮抗體（抗試劑），同時抗玉米赤霉烯酮抗體與酶標二抗（酶標物）相結(jié)合，經(jīng)TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含玉米赤霉烯酮的含量成負相關(guān)，對照標準曲線，再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中玉米赤霉烯酮的含量。

【試劑盒組成】

1. 96 孔板（8 孔*12 條）

2. ZEN 標準溶液×5 瓶：（1.5mL/瓶）

0 ng/mL, 1 ng/mL,3ng/mL,10ng/mL, 25 ng/mL

3. ZEN 酶標物1 瓶.............. ....................................6mL

4. ZEN 抗試劑1 瓶....................................................6mL

5. 底物液1 瓶.............................................................6mL

6. 顯色液1 瓶.............................................................6mL

7. 終止液1 瓶.............................................................6mL

8. 濃縮洗滌液（20×） 1 瓶...............................20mL

9. 樣品稀釋液Ⅰ 2 瓶.............................................40mL

10. 樣品稀釋液Ⅱ 2 瓶.............................................40mL

11. 反應(yīng)板支架.............................................................1 塊

注：48 孔型號試劑盒內(nèi)容物數(shù)量、體積略有差別

【需要而未提供的設(shè)備及試劑】

設(shè)備：

┅┅酶標儀450nm

┅┅振蕩器

┅┅粉碎機

┅┅離心機

┅┅天平：感量0.01g

┅┅微量移液器：單道20μL~200μL、100μL~1000μL

┅┅甲醇

┅┅去離子水

注：以上儀器均可代購

【試劑配制】

1. 洗滌工作液：將濃縮洗滌液用去離子水按1:19 體積比進行稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水）。

2. 60%甲醇-水：取無水甲醇，用去離子水按6:4 體積比例稀釋（6 份無水甲醇＋4 份水）。

【樣本前處理步驟】

一、小麥、大麥等谷物及其加工制品（稀釋倍數(shù)：20）

1. 稱取5.0g 粉碎后樣品，加入25.0mL60%甲醇-水；

2. 充分振蕩30min 后過濾或4000rpm 離心5-10min；

3. 將濾液或上清液用去離子水以1:3 稀釋（例：1mL 濾液+3mL 去離子水），充分混勻后即為待測樣液；

4. 移取該樣液50uL 進行檢測。

二、玉米粉、麥類、麩皮、豆粕等谷物類以及玉米蛋白粉、雞料等飼料（稀釋倍數(shù)：60）

1. 稱取5.0g 粉碎后樣品，加入25.0mL60%甲醇-水；

2. 充分振蕩30min 后過濾或4000rpm 離心5-10min；

3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅰ以1:11 稀釋（例：100μL濾液+1100μL 樣品稀釋液Ⅰ），充分混勻后即為待測樣液；

4. 稀釋后的待測樣液需pH 值約7.0 左右，移取該液50uL進行檢測。

三、DDGS、玉米皮等飼料原料及豬料、鴨料、牛料等飼料混

合料（稀釋倍數(shù)：60）

1. 稱取5.0g 粉碎后樣品，加入25.0mL60%甲醇-水；

2. 充分振蕩30min 后過濾或4000rpm 離心5-10min；

3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅱ以1:11 稀釋（例：100μL濾液+1100μL 樣品稀釋液Ⅱ），充分混勻后即為待測樣液；

4. 稀釋后的待測樣液需pH 值約7.0 左右，移取該液50uL 進行檢測。

注意：若樣品中ZEN 偏高，建議將樣品提取液再進一步稀釋后檢測。

【檢測步驟】

一、測定前須知：

1. 使用之前將所有試劑和所需板條回溫（20~25℃）。

2. 使用之后立即將所有試劑及剩余板條放置2~8℃。

3. ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致

性，正確的洗板操作是ELISA 操作中的要點。

4. 在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，可用蓋板膜蓋

住微孔板。

二、操作步驟：

1. 將所需試劑及微孔板取出，放置室溫（20~25℃）30min

以上，液體試劑使用前均須搖勻。

2. 取出所需數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放回鋁箔袋中，

放置于2~8℃冷藏。不可冷凍。

3. 配置好的洗滌工作液在使用前也需回溫。

4. 將樣本和標準品對應(yīng)微孔編號，建議每個樣本和標準品做2 孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5. 每孔加入250μL 左右洗滌液，洗滌液不得溢出，放置40s左右，甩掉洗滌液，在吸水紙上拍干。

6. 分別加入標準溶液/待測樣液50μL 到對應(yīng)的微孔中，加入酶標物50μL/孔，后再加入抗試劑50μL/孔，輕輕震蕩混勻，遮蓋后室溫（25℃）避光反應(yīng)20min。

7. 小心揭開蓋板，甩掉反應(yīng)液，加入洗滌液250μL/孔充分洗滌5 次，每次間隔40s，用吸水紙拍干。

8. 每孔分別加入底物液和顯色液各50μL，輕輕震蕩混勻，遮蓋后室溫（25℃）避光顯色15min。

9. 加入終止液50μL/孔，輕輕震蕩混勻，設(shè)酶標儀于450nm處讀取每孔OD 值。

(若無酶標儀，則不加終止用目測法可進行判定)。

★注：該試劑盒佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導

致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。若環(huán)境溫度高于或低于

25℃，請適當縮短或增加反應(yīng)及顯色時間。如有疑問，歡迎

垂詢。

【結(jié)果判定】

標準曲線的繪制與計算

用酶標儀測得每孔的光密度值(A)，繪制標準曲線。通過

準曲線，可準確定量樣品中ZEN 含量。

標準曲線：橫坐標為ZEN 標準濃度的對數(shù)，縱坐標為百

分比（即各標準品孔和樣品孔光密度值除以0 ng/mL 標準品

孔光密度值(A0)再乘以100%所得， 光密度值(標準孔或樣品

孔) ／光密度值(A0)×100%=%(縱坐標)）。相應(yīng)每個樣品的

ZEN 濃度可從曲線上獲得。歡迎索取專門的數(shù)據(jù)處理軟

件進行計算。

備注：試劑盒初篩后，若出現(xiàn)陽性結(jié)果，建議用仲裁法進一步

確證。

【注意事項】

1. 試劑及樣本沒有恢復到室溫（20~25℃）會導致所有標準

的OD 值偏低。

2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準

曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)

立即進行下一步操作。

3. 每種試劑使用前均需搖勻。

4. 反應(yīng)終止液為2M 硫酸，避免接觸皮膚。

5. 不要使用過了有效期的試劑盒；也不要摻雜使用過了有

效期的試劑盒；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6. 儲存條件：試劑盒保存于2~8℃，不能冷凍，將不用的

微孔板重新真空密封。標準物質(zhì)和無色的顯色劑對光敏

感，因此要避光保存。

7. 試劑變質(zhì)的跡象：顯色試劑有任何顏色表明顯色劑變質(zhì)，

應(yīng)當棄之。0 標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5

（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。

8. 對玻璃器皿和ZEN 溶液消毒好用次氯酸鈉（10%，v/v）

溶液浸泡過夜。

9. 該試劑盒采用室溫反應(yīng)（20~25℃），當反應(yīng)溫度高于

25℃或者低于20℃時，均需相應(yīng)縮短或延長反應(yīng)時間，

【貯藏條件及保存期】

貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。

保存期：該產(chǎn)品有效期為6 個月。生物試劑日期見包裝盒。

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