隨著電子檢驗(yàn)儀器的研制和普遍使用，推動(dòng)了科研診斷試劑研究和使用廣泛化的進(jìn)程，商品試劑與標(biāo)準(zhǔn)液按檢測(cè)項(xiàng)目組合成一套放在一個(gè)包裝盒內(nèi)叫試劑盒（reagent kit），或叫試劑組合（reagent set）。

   與自動(dòng)化分析儀或者酶標(biāo)儀匹配的試劑盒的研制、生物試劑和供應(yīng)走向產(chǎn)業(yè)化的道路，它無(wú)疑是科研檢驗(yàn)發(fā)展*一個(gè)巨大的技術(shù)進(jìn)步。但是，試劑盒的質(zhì)量，將嚴(yán)重影響測(cè)定結(jié)果的正確性。為了增強(qiáng)識(shí)別試劑質(zhì)量的能力，提高拒用劣質(zhì)試劑的自覺(jué)性，掌握有關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量評(píng)價(jià)是十分有益的。

   我們先來(lái)說(shuō)說(shuō)和自動(dòng)生化分析儀想匹配的生化分析試劑盒的相關(guān)情況。此類(lèi)試劑種類(lèi)繁多，有液體型、粉劑型、片劑型，有單一試劑、雙試劑、干試劑、多試劑等。

一、液體型試劑和粉（片）劑型試劑

（一）液體型試劑

無(wú)論是單試劑還是雙試劑型試劑，目前乃至今后仍以液體型為主要?jiǎng)┬?。其?yōu)點(diǎn)是液體型試劑

的試劑組分高度均一，瓶間差異小，測(cè)定重復(fù)性好和使用方便；它也無(wú)需加入任何輔助試劑及蒸餾

水，避免了外源性水質(zhì)對(duì)試劑的影響，性能較穩(wěn)定，測(cè)定結(jié)果較為準(zhǔn)確。缺點(diǎn)是液體型試劑（尤其

是酶試劑）保存時(shí)間較短，不便于運(yùn)輸。

1．液體單試劑        

所謂液體單試劑就是將某種生化檢驗(yàn)項(xiàng)目所用到的試劑科學(xué)地混合在一起，

組成為一種試劑。應(yīng)用時(shí)，只須將標(biāo)本和試劑按一定比例混合，即可進(jìn)行相應(yīng)的生化反應(yīng)，然后用

適當(dāng)?shù)姆椒z測(cè)結(jié)果。應(yīng)用十分方便。為了簡(jiǎn)化測(cè)定操作程序，提高工作效率，一度大多數(shù)試劑廠

家都生物試劑單試劑，以滿足用戶的需要。如測(cè)定葡萄糖和膽固醇的酶法試劑等。這些試劑的廣泛使用，

充分顯示出酶法試劑無(wú)毒性、操作簡(jiǎn)便快速、測(cè)定結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)。但對(duì)有些生化檢驗(yàn)項(xiàng)目來(lái)說(shuō)，

單試劑存在抗干擾能力差的缺點(diǎn)，給測(cè)定結(jié)果帶來(lái)相當(dāng)大的分析誤差。例如，甘油三酯測(cè)定的一步

法試劑，由于未消除樣品中的游離甘油，使測(cè)定結(jié)果中包括了內(nèi)源性甘油（平均約為 0.11mmol/L），會(huì)給甘油三酯的測(cè)定值帶來(lái)較大的誤差。類(lèi)似的情況還見(jiàn)于維生素C和尿酸及膽紅素對(duì)Trinder+選用時(shí)值得注意。

2．液體雙試劑       所謂液體雙試劑就是將某些生化檢測(cè)項(xiàng)目所用到的試劑，按用途科學(xué)地分成兩類(lèi)，分別配成兩種試劑，通常試劑加入后可起到全部或部分消除某些內(nèi)源性干擾的作用，第二試劑為啟動(dòng)被檢測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的試劑，兩種試劑混合后才共同完成被檢項(xiàng)目的生化反應(yīng)。然后用適當(dāng)?shù)姆椒z測(cè)結(jié)果。雙試劑型試劑盒，它保持了單試劑的優(yōu)點(diǎn)，增強(qiáng)了抗干擾能力和試劑的穩(wěn)定性，提高了測(cè)定的準(zhǔn)確性，代表了診斷試劑盒劑型研制的主要發(fā)展方向。

（二）粉（片）劑型試劑

所謂粉劑型及片劑型試劑，即是將試劑的各組分用球磨技術(shù)粉碎成粉劑或混合后壓成片劑，使

用前再加入的溶液復(fù)溶成液體試劑。干粉試劑如果在凍干分裝前是液體型的，則其各組分是相

當(dāng)均勻的；但如果用固體原料研磨后制成粉劑或片劑，則存在許多問(wèn)題：①要使試劑各組分混合得

非常均勻，技術(shù)難度很大；②分裝過(guò)程中的稱(chēng)量誤差及復(fù)溶時(shí)加水量的準(zhǔn)確性影響試劑的瓶間差；

③水質(zhì)優(yōu)劣對(duì)試劑的穩(wěn)定性和測(cè)定的可靠性有相當(dāng)大的影響。

二、其它類(lèi)型試劑

為了適應(yīng)生化分析儀和測(cè)定方法學(xué)的進(jìn)步，近年來(lái)研究了許多新型的試劑盒，主要有以下幾種。

（一）快速反應(yīng)試劑盒

快速反應(yīng)試劑盒主要是為了適應(yīng)生化分析的技術(shù)進(jìn)步，縮短反應(yīng)時(shí)間，提高工作效率。如血液

葡萄糖快速測(cè)定試劑盒。其試劑成分及濃度為磷酸鹽緩沖液  100mmol/  L，pH7.4±0.1，葡萄糖氧

化酶  > 40u / ml，變旋酶  > 0.2u / ml，過(guò)氧化物酶  > 2.5u / ml，4-氨基安替比林 0.5 mmol/ L，

4-羥基苯甲酸 4  mmol/L，亞鐵qing化鉀 1mg  /  L，疊氮鈉 0.4g  /  L。同一般葡萄糖氧化酶法試劑相

比是明顯增加了葡萄糖氧化酶及過(guò)氧化物酶用量，更主要是增加了變旋酶，可使反應(yīng)加快，3～4

分鐘后即生成終顏色。再如快速膽固醇試劑盒，用的是 pH6.6±0.2，250mmol/ L 磷酸鹽緩沖液，

膽固醇酯酶為 250u / L，膽固醇氧化酶 250 u/L，過(guò)氧化物酶 4000u / L，4-氨基安替比林 0.3mg /

L，DHBS      8mmol/  L。樣品與試劑比例是 1:100。37℃反應(yīng) 2 分鐘即可完成反應(yīng)?？梢悦黠@看出是

加大膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶等效應(yīng)酶用量，從而使反應(yīng)加速。目前要求這種快速反應(yīng)的試劑用

戶還不多，但它是一種發(fā)展趨勢(shì)。

（二）一步法試劑盒

這是隨著方法學(xué)的改進(jìn)，特別是免疫技術(shù)的進(jìn)步，利用特異性抗體參與反應(yīng)的新型試劑。如高

密度脂蛋白（HDL）測(cè)定。以往多采用超速離心法和沉淀法使 HDL 從其他脂蛋白中分離后再測(cè)定 HDL中膽固醇，沉淀法操作繁瑣，必須預(yù)先處理才能用生化分析儀分析。近年來(lái)采用抗低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白血清預(yù)先抑制 LDL 及 VLDL，然后再測(cè)定 HDL，這樣就減少沉淀預(yù)處理，直接測(cè)定出高密度膽固醇。類(lèi)似的試劑盒還有肌酸激酶（CK）及其同工酶 CK-MB 的測(cè)定。

（三）多項(xiàng)同測(cè)組合試劑盒

這類(lèi)型試劑主要是用于三點(diǎn)雙項(xiàng)同測(cè)終點(diǎn)法、三點(diǎn)雙項(xiàng)同測(cè)連續(xù)監(jiān)測(cè)法和三點(diǎn)雙項(xiàng)同測(cè)終點(diǎn)速

率法測(cè)定的試劑盒。很明顯這類(lèi)試劑同以往單試劑和雙試劑有明顯不同。隨著雙試劑的應(yīng)用，研究

生化分析儀的分析方法也相應(yīng)發(fā)展，其中有一種分析方法是在同一比色杯中，先后加入兩種試劑與

檢品中的兩種被檢物發(fā)生反應(yīng)，在各反應(yīng)達(dá)到平衡期時(shí)分別測(cè)定，整個(gè)測(cè)定過(guò)程進(jìn)行三次比色，測(cè)

定兩個(gè)項(xiàng)目，稱(chēng)為三點(diǎn)雙項(xiàng)同測(cè)終點(diǎn)法。例如甘油三脂、膽固醇同時(shí)測(cè)定法。該法的試劑為

Tris 緩沖液，含膽固醇酯酶、ATP、MgCl2、過(guò)氧化物酶、磷酸甘油氧化酶、甘油激酶、脂肪酶、4-

氨基安替吡啉、2-羥 3.5-氯苯磺酸鈉、Triton-X 等，第二試劑為 Tris 緩沖液，其中含膽固醇氧化酶。當(dāng)血清或標(biāo)準(zhǔn)液（包括甘油三酯和膽固醇）與試劑混合后立即進(jìn)行次比色（510nm）

得空白吸光度。37℃作用 5 分鐘后進(jìn)行第二次比色，為甘油三酯與酶試劑反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度，又是

膽固醇測(cè)定的空白吸光度。然后加入第二試劑，37℃作用 5～10 分鐘，進(jìn)行第三次比色，為膽固醇

與酶試劑反應(yīng)終點(diǎn)的吸光度。

甘油三酯濃度=[A2（樣品）-AB（樣品）]/[A2（TG  標(biāo)準(zhǔn)）-AB（TG  標(biāo)準(zhǔn)）]×甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)的濃度

總膽固醇濃度=[A3（樣品）-A2（樣品）]/[A3（TC  標(biāo)準(zhǔn)）-A2（TC  標(biāo)準(zhǔn)）]×膽固醇標(biāo)準(zhǔn)的濃度

（四）卡式試劑盒

試劑首先裝入試劑瓶，瓶上充分使用編碼技術(shù)，而后根據(jù)編碼啟動(dòng)調(diào)配、使用及更換儲(chǔ)存。其

特點(diǎn)是：①卡式試劑瓶上條碼令使用者可快捷準(zhǔn)確地輸入試劑數(shù)據(jù)，如測(cè)試數(shù)量、批號(hào)、有效期，

保證正確識(shí)別試劑。②試劑裝載后能自動(dòng)調(diào)配，可消除潛在誤差，并節(jié)省操作時(shí)間。③持續(xù)不斷地

監(jiān)察儀器上已裝載的試劑存量，并在供應(yīng)量不足時(shí)通知使用者。試劑裝載使用時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月。

④所有卡式試劑盒大小劃一，有利儲(chǔ)存?？ㄊ皆噭┰O(shè)計(jì)較*，可防止試劑蒸發(fā)及降解，能確保試

劑裝載后的穩(wěn)定性更長(zhǎng)，從而節(jié)省成本。⑤標(biāo)簽根據(jù)測(cè)試類(lèi)別以顏色編碼，便于使用者識(shí)別。

（五）濃縮試劑盒

上述卡式試劑盒就是采用的濃縮試劑，使用時(shí)自動(dòng)完成稀釋?zhuān)笥糜跍y(cè)定。濃縮試劑便于工

作、儲(chǔ)存、運(yùn)輸、裝載等*性是很明顯的，濃縮試劑便于監(jiān)控、減少校正次數(shù)、提高工作質(zhì)量。

在濃縮試劑基礎(chǔ)上又組成雙試劑及多項(xiàng)同測(cè)組合試劑，又體現(xiàn)出它們所具有的特點(diǎn)及*性。

三、液體雙試劑盒的特點(diǎn)

液體雙試劑與其它類(lèi)型試劑比較具有液體試劑和雙試劑的優(yōu)點(diǎn)。

（一）提高了抗干擾反應(yīng)的能力

在研究生化測(cè)定過(guò)程中，血標(biāo)本除了含有待測(cè)物質(zhì)外，還含有各種酶、有機(jī)物、無(wú)機(jī)鹽等物質(zhì)，

這些物質(zhì)都會(huì)干擾或參與測(cè)試反應(yīng)，引起非特異性反應(yīng)干擾，而雙試劑型試劑盒設(shè)計(jì)的一個(gè)主要目

的就是為了克服這種干擾反應(yīng)。在測(cè)定過(guò)程中，首先讓試劑Ⅰ與標(biāo)本中的干擾物質(zhì)反應(yīng)，反應(yīng)  5

分鐘后，再用試劑Ⅱ啟動(dòng)真正的測(cè)試反應(yīng)，從而使測(cè)定結(jié)果更加準(zhǔn)確。

例如：尿素氮的酶法測(cè)定。此測(cè)定通過(guò)二步化學(xué)反應(yīng)來(lái)完成。

在 340nm 下監(jiān)測(cè)吸光度值的變化，與同樣處理的尿素標(biāo)準(zhǔn)液比較，計(jì)算出樣品尿素含量。這

一反應(yīng)的步特異性高，脲酶只對(duì)樣品中的尿素起催化作用，但第二步反應(yīng)就存在一些干擾：樣

品中（如血清、尿液）含有 NH4，（內(nèi)源性 NH4）會(huì)消耗 NADH，使測(cè)定結(jié)果偏高；復(fù)溶試劑時(shí)所

用蒸餾水如果含有 NH4 或者所用器材不夠清潔被 NH4 污染（外源性 NH4）也會(huì)消耗 NADH，使測(cè)

定結(jié)果偏高；當(dāng)樣品中（如血清）含有較高的丙酮酸時(shí)，血清中的乳酸脫氫酶會(huì)催化下列反應(yīng)：

LDH

單一試劑型試劑測(cè)定尿素時(shí)存在內(nèi)源性 NH4、外源性 NH4 和內(nèi)源性丙酮酸的干擾，使測(cè)定結(jié)果產(chǎn)

生正誤差。

測(cè)定尿素的酶法雙試劑（液體型）試劑盒有兩個(gè)試劑，均為液體，不必復(fù)溶。試劑含α—

酮戊二酸、NADH、谷氨酸脫氫酶及維持 pH 的緩沖物質(zhì)。第二試劑含脲酶、NADH、α—酮戊二

酸。當(dāng)被檢樣品加入試劑在 37℃作用 5 分鐘，將內(nèi)源 NH4、外源性 NH4 及內(nèi)源性丙酮酸消耗 。 接 著 加 入 第 二 試 劑 使 樣 品 中 的 尿 素 被 脲 酶 水 解 成   NH4 ， 再 進(jìn) 行 第 二 步 反 應(yīng) ，

GLDH

了尿素測(cè)定的準(zhǔn)確性。

再如：目前在研究化學(xué)檢測(cè)中用的較為普遍的指示反應(yīng) Trinder 反應(yīng)（主要用于代謝產(chǎn)物的測(cè)

定，如葡萄糖、尿酸、甘油三脂、膽固醇、HDL），此指示反應(yīng)的特異性較差，受到血標(biāo)本中的膽

紅素、抗壞血酸的干擾，導(dǎo)致結(jié)果的陰性偏差。其中為了克服膽紅素的干擾，國(guó)內(nèi)外部分試劑已通

過(guò)加入鐵qing化鉀、調(diào)整顯色劑改變測(cè)定波長(zhǎng)來(lái)排除膽紅素的干擾，而抗壞血酸的影響和干擾一直較

難克服，從面影響了測(cè)定結(jié)果。液體雙試劑（包括甘油三脂、膽固醇、HDL、尿酸、肌酐）在試

劑 I 中加入了抗壞血酸氧化酶，當(dāng)標(biāo)本和試劑 I 先反應(yīng)，便可克服標(biāo)本抗壞血酸的干擾，當(dāng)抗干擾

反應(yīng)完畢后，再加入試劑Ⅱ啟動(dòng)反應(yīng)，從而使得整個(gè)反應(yīng)的特異性大大提高，準(zhǔn)確度也相應(yīng)提高。

另外，常見(jiàn)的干擾是黃疸。有的測(cè)定試劑中加有膽紅素氧化酶，先作用黃疸血清使其氧化無(wú)

色，而后再加反應(yīng)試劑完成反應(yīng)測(cè)定，消除黃疸的影響。

（二）使測(cè)定更科學(xué)合理

由于液體雙試劑的使用，使測(cè)定更加科學(xué)合理。如

LP

GK

GPO

POD

目前國(guó)內(nèi)研究生化檢驗(yàn)使用的生化試劑絕大多數(shù)都是單一試劑，在甘油三脂測(cè)定中測(cè)得甘油三

脂的含量實(shí)際上是標(biāo)本中甘油三脂與游離甘油的總含量，盡管研究上可以通過(guò)減去標(biāo)本中平均游離

甘油的含量和修改正常范圍加以彌補(bǔ)，但是，由于研究標(biāo)本的個(gè)體差異，使得血標(biāo)本中游離甘油的

含量不可能都一樣。而液體雙試劑可先讓標(biāo)本與試劑 I 反應(yīng)（試劑 I 中包括甘油激酶、抗壞血酸氧

化酶、甘油—3—磷酸氧化酶、過(guò)氧化物酶），從而*消耗標(biāo)本中游離甘油，排除抗壞血酸的干擾，

然后再用試劑Ⅱ含有 LP 和發(fā)色團(tuán)啟動(dòng)反應(yīng)，使得測(cè)得的結(jié)果真正反映標(biāo)本中甘油三脂的含量。

（三）穩(wěn)定性能優(yōu)良

目前研究化學(xué)檢定的許多項(xiàng)目都已用酶法進(jìn)行測(cè)定，這些酶法測(cè)定與以往化學(xué)測(cè)定法相比具有

*的*性：①特異性高；②試劑單一，操作步驟簡(jiǎn)單，可自動(dòng)操作；③反應(yīng)溫和，無(wú)污染

等。但是酶法生化商品試劑生物試劑的大技術(shù)障礙便是試劑的穩(wěn)定性問(wèn)題，為此許多試劑生物試劑廠家推

出了凍干、干粉、片劑的酶法試劑，從而解決了成品貯存與運(yùn)輸問(wèn)題，然而在使用過(guò)程中仍然受到

了復(fù)溶后穩(wěn)定性的影響，各實(shí)驗(yàn)室在使用中如果包裝太大，復(fù)溶后穩(wěn)定期過(guò)后便會(huì)造成浪費(fèi)，如果

包裝太小，本身價(jià)格太高，造成日?；?yàn)成本居高不下。全液體酶法試劑從分配上解決了這一矛盾：

①用戶可根據(jù)每次標(biāo)本量多少按一定比例配制適量工作液，當(dāng)天配制當(dāng)天用完，這樣便可減少試劑

損失。②如果用戶使用的自動(dòng)生化分析儀有雙試劑測(cè)定功能，那么，就不必把雙試劑混合成工作試

劑進(jìn)行測(cè)定，試劑的有效期一年便是工作液的有效期。

對(duì)于干粉、片劑型等需復(fù)溶的生化試劑，水質(zhì)的好與壞直接影響了復(fù)溶后工作液的穩(wěn)定性和測(cè)

定重復(fù)性。目前除了一些大城市的三級(jí)醫(yī)院有自制的試劑級(jí)的蒸餾水外，別的醫(yī)院很難獲得符合試

劑級(jí)要求的水，這就對(duì)干粉、片劑試劑的實(shí)際使用造成了一定影響。目前研究化學(xué)檢測(cè)中許多項(xiàng)目

已經(jīng)開(kāi)始用酶法進(jìn)行分析測(cè)定，而試劑中許多酶在水溶液中是比較“脆弱”的，許多雜質(zhì)都會(huì)影響

酶活力，如①水中  F  會(huì)引起某些酶失活；②水中的重金屬離子會(huì)影響酶活力；③水中某些微生物

會(huì)引起酶失活，除了水中某些“雜質(zhì)”會(huì)引起試劑中酶失活、部分失活而導(dǎo)致穩(wěn)定性、重復(fù)性下降

外，有些“雜質(zhì)”會(huì)直接影響測(cè)定結(jié)查，如水中含有 NH4 便會(huì)直接影響尿素氮測(cè)定的準(zhǔn)確度。全

液體型生化試劑，在使用過(guò)程無(wú)需任何輔助試劑及蒸餾水，這就保證避免了外源水質(zhì)而引起的對(duì)試

劑的影響，保證了試劑在有效期內(nèi)的穩(wěn)定和測(cè)定結(jié)果的可靠。

（四）試劑組分高度均一

試劑中每一組分均一性是影響試劑測(cè)定重復(fù)性的一個(gè)重要因素。在干粉、片劑與凍干生化試劑

生物試劑過(guò)程要使每一試劑中十幾種組分（有的組分含量相當(dāng)微量）分布相對(duì)均勻也是一個(gè)技術(shù)難度較

高的課題。在每一種試劑生物試劑過(guò)程中必須解決：①原料干粉生物試劑過(guò)程中每一組分的均勻性（凍干生

化試劑在凍干分裝前由于是液體的，每個(gè)組分是相當(dāng)均勻）。②在分裝過(guò)程中由于加樣誤差引起的

均勻性問(wèn)題（這一問(wèn)題在凍干分裝過(guò)程中同樣存在：在片劑生物試劑過(guò)程中體現(xiàn)為每一片劑重量誤差）。

③在使用過(guò)程中，由于需加入復(fù)溶水，復(fù)溶水的加樣誤差也會(huì)造成瓶與瓶之間同一組分濃度不盡一

樣。上述三個(gè)原因或其中一個(gè)原因都會(huì)造成實(shí)際測(cè)定過(guò)程中的瓶間誤差，從而引起測(cè)定重復(fù)性下降。

液體型的生化試劑從生物試劑到使用全是液態(tài)，這就保證了每一個(gè)組分相對(duì)均勻，哪怕是十分微量的組

分，這就避免了實(shí)際操作中的誤差，能提高試劑測(cè)定的重復(fù)性。